培养条件包括：气相95%空气与5%二氧化碳，培养温度设置于37℃。使用F12K培养基，加入10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素（P/S）。该细胞系来源于58岁白人男性患者的肺癌组织。

A549细胞能够通过胞苷二磷酸胆碱途径合成高含量的不饱和脂肪酸的卵磷脂。

传代方法

在细胞生长未超过80%汇合度的情况下，将培养瓶中的完全培养液收集至离心管，保留5ml培养基置于37℃、5% CO2孵箱中继续培养；如细胞密度超过80%，则可进行传代。

具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，置于37℃的培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞是否已变圆并脱落，若是，快速轻敲培养瓶并加入超过5ml的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打使细胞完全脱落后，吸出悬液，转移至15ml离心管中以1000rpm离心5分钟，弃去上清液，再补充1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 将重悬的细胞按1:2的比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml每瓶，然后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

细胞冻存

当细胞覆盖培养瓶的80%表面时，弃去培养液并用PBS冲洗。添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞回缩变圆后，加入5ml的完全培养基以终止消化。轻轻吹打使细胞脱落，并将悬液转移至15ml离心管中进行离心。

随后，弃去上清，沉淀细胞后加入1ml无血清冻存液（如利来国际提供的相关产品），混匀后转入冻存管。将冻存管直接放入-80℃冰箱中保存，如需转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中保存24小时以上。

细胞复苏

取出液氮中的细胞冻存管，快速放入37℃水浴中解冻，直到冻存管中无结晶后用75%酒精擦拭外壁。将冻存管内的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，离心5分钟以沉淀细胞。

弃上清后用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶中，放于37℃、5% CO2的细胞培养箱中，第二天更换新鲜完全培养基。

需要注意的是，细胞在运输过程中可能会脱落，这是正常的现象。如脱落较多，可以将培养瓶中的培养液收集到离心管中，经过离心处理后，终止反应并按比例进行传代，确保细胞健康生长。

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