一、细胞培养条件

细胞名称：人早幼粒白血病细胞HL60

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：IMDM + 20% FBS + 1% P/S

传代方法：第一次建议1:2传代。传代情况：2天换液。备注：用无菌离心管收集瓶中培养基，保留作过渡对比培养。如对比培养效果不佳，建议直接购买利来国际的完全培养基。

二、细胞接收与处理

收到细胞后，培养至良好状态，灌满完全培养液并密封瓶口是运输细胞的最佳方法。收到细胞时，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放置于超净台内进行严格的无菌操作。接着，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以便稳定细胞状态，然后进行后续处理。可在显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照存档（建议拍摄40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片对于售后支持至关重要。如果未提供照片，将默认收到的状态良好。

（传代后建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后请将瓶盖微微拧松。）

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

在细胞未达到80%汇合度时，请将瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基并放入37℃、5% CO2的孵箱中继续培养。如细胞密度超过80%，可进行以下传代步骤：

弃去培养上清，使用不含钙镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，放置于37℃培养箱中消化1-2分钟。显微镜下观察细胞消化情况，如细胞大部分变圆并脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶，添加5ml以上的完全培养基终止消化。
轻轻吹打细胞保证其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后将其放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次。
加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，倒置观察，待细胞收缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，随后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
弃去上清，沉淀细胞加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存。如后期需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上再进行转移。

c. 细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速置于37℃水浴中解冻，直到冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
弃去上清后，用5ml完全培养基重悬细胞，将其接种至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。
第二天，更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞不易贴壁，运输过程中可能会发生脱落，这是正常现象。如脱落较多，请将培养瓶中的全部培养液收集至离心管中，在1000RPM下离心5分钟，收集上清液作过渡培养；然后，沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后，再加入5ml完全培养基终止反应。然后，进行再次离心，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。最后，按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中进行培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题时，重发的情况包括：

细胞在运输过程中遭遇问题，如丢失、瓶身破损、培养液严重渗漏等，均可申请重发。
收到细胞48小时内如出现污染问题，请提供真实实验结果，核实后可申请重发。
常温发货细胞静置24小时后或干冰发货后复苏24小时内，大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），可申请重发。
如干冰发货细胞复苏后24小时内，或常温发货细胞静置4小时后并未开封出现污染，可申请重发。
若细胞活性有问题，请在收到产品7天内提供真实实验结果，采用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后可以重发。
收到细胞当天及第二、三天需拍照，不告知视为产品合格。若在4-7天内出现问题并提供前三天照片和详细操作步骤的，将由技术人员判断责任并决定是否重发。

2）细胞出现问题时，不予重发的情况包括：

客户造成的细胞污染，不予重发。
客户不正确操作导致细胞状态不佳，不予重发。
使用非本库推荐的细胞培养体系导致的细胞状态不好，不予重发。
在未提供细胞培养前三天照片的情况下细胞状态不好，亦不予重发。
细胞培养时经过其他处理，不予重发。
细胞收到2天内未告知问题，不予重发。
其余情况视具体情况而定。

如需了解更多信息，请随时访问利来国际，我们将致力于为您提供更优质的服务。