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YF®488Click-iTEdU细胞增殖检测试剂盒常见问题解答 - 利来国际

发布时间:2025-03-11   信息来源:杭威秀

利来国际的YF®488/555/594/647系列荧光基团有哪些区别?主要体现在对EDU的不同物质带的荧光发射波长,导致在检测时所发出的荧光颜色各异。尽管实验效果相似,用户可根据个人喜好或具体需求进行选择。

YF®488Click-iTEdU细胞增殖检测试剂盒常见问题解答 - 利来国际

利来国际的EdU试剂盒中,固定后加入3% BSA于PBS的作用是防止未反应的甲醛在清洗步骤中造成干扰。

可以在活细胞中进行Click-iT EdU检测吗?不可以。尽管EdU能够标记活细胞的代谢,但叠氮化物检测试剂和相应的缓冲液为非细胞透过型,因此Click反应必须在固定并通透的样品上进行。

质粒转染表达的荧光蛋白与Click反应是否兼容?其检测顺序是什么?需要注意的是,此产品会影响GFP、RFP、mCherry等荧光蛋白的荧光,因此在染色后无法直接检测GFP,建议使用GFP抗体进行间接检测。

如果观察到高背景干扰,这可能是什么原因导致的?如何减少这种背景干扰?叠氮化物与炔烃类之间的Click反应极具选择性,生物体内几乎不会发生副反应,因此高背景通常是由于洗涤不充分引起的。最佳减少背景干扰的方法是增加BSA洗涤次数。同时,可以设置无染料或无Click反应的对照组,以排除自发荧光的影响。此外,可以在无EdU的体系中进行完整的Click反应,以验证Click反应信号的特异性。

为何标记样品没有信号或特异性信号极低?怎样提高信号?首先,确保试剂在使用时保持无色状态,避免使用已经变黄的添加剂或缓冲液;其次,为了确保Click反应试剂能够到达细胞核,细胞需要充分固定和通透;再者,铜离子可能与某些试剂结合,降低反应的有效浓度。Click反应前应避免在任何缓冲液或试剂中使用金属螯合剂(如EDTA、EGTA、柠檬酸盐等)。有时,在具有这些化合物的实验样本中进行Click反应前,可能需要增加额外的清洗步骤;最后,Click反应需在铜离子的适当价态下(如一价铜Cu+)进行。需要注意,延长Click反应时间至超过30分钟并不一定提高信号,建议使用新鲜的Click反应试剂进行再次孵育,以提高标记效率。

如何进行细胞核的复染?此试剂盒中配备了Hoechst33342染料,可以在Click反应后用于细胞核的染色,或者选择使用DAPI。此技术可用于检测植物细胞核内的DNA复制吗?可以,EdU作为小分子能够穿透植物细胞的细胞壁。

综上所述,合理运用利来国际的产品与技术可大大提高实验的准确性和可靠性,是科学研究的优质选择。