ELISA，即酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay），自1971年由Engvall等人首创以来，逐渐演变为生物科学研究中一项不可或缺的工具。该技术基于免疫组化中的酶免疫分析方法，通过固相免疫测定的形式，有效地检测体液中微量且关键的生物标志物。随着免疫荧光和放射免疫技术的发展，ELISA凭借其独特的优势迅速崛起，并在临床检验领域占据了重要位置，成为生物学和医学科学研究中的重要工具。如今，让我们深入探讨ELISA的基本原理及其分类，分析直接法、间接法、夹心法和竞争法四种主要方法之间的区别与优缺点，以帮助有疑问的同学们更好地理解这一实验技术的奥秘。

ELISA的基本原理

ELISA是一种基于免疫反应的高灵敏度实验技术。其基本原理是利用抗原与抗体之间的特异性反应，结合酶对底物的高效催化作用，以检测靶蛋白的含量。在实验过程中，抗原或捕获抗体会被固定在固相载体上，通过检测分子（如酶或荧光基团），将化学信号转换为电信号，以OD值或发光值的结果进行靶蛋白的定量分析。

ELISA的分类

ELISA不仅可用于测定抗原，还可检测抗体。根据ELISA实验的原理及操作的不同，可将其大致分为四类：直接法、间接法、夹心法和竞争法。

直接法（Direct ELISA）

直接法将抗原或抗体固定于酶标板上，然后用带有酶标记的一级抗体或一级抗原进行特异性结合。随后，借助酶催化底物显色，即可测定总靶标蛋白的含量。

间接法（Indirect ELISA）

间接法常用于检测抗体。首先将抗原固定在酶标板上，加入特异性结合的一级抗体，再加入带有酶标记的二抗，最后通过底物反应显色来测定靶标蛋白的含量。

夹心法（Sandwich ELISA）

夹心法可分为双抗体夹心法和双抗原夹心法，适用于检测具有多个识别位点的大分子蛋白。双抗体夹心法将抗体固定在固相载体上，待测抗原与之特异性结合后，再加入酶标抗体进行测定。双抗原夹心法则用固相抗原和酶标特异性抗原替代固相抗体和酶标抗体，用以测定样品中的抗体。此法的显色结果与待检抗原（或抗体）的量成正比。

竞争法（Competitive ELISA）

竞争法适用于测定只有一个识别位点的小分子物质。其原理在于样本中的抗原与一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。样本中的抗原含量越多，结合在固相上的酶标抗原就越少，最终显色也越浅，显色结果与待检抗原（或抗体）的量成反比。

四种ELISA方法的比较

不同类型的ELISA方法各有其适用性及优劣之处：

了解ELISA的基本原理、分类及不同方法的特点，能够帮助我们根据实际需求选择最合适的检测方案，从而提高实验的准确性和效率。更多关于ELISA实验的专业内容，敬请关注利来国际，为您的生物医疗研究提供持续支持！