1. 目的细胞按照标准细胞培养方案在血清培养基中进行培养。 2. 在检测前一天，使用无血清培养基（0.2% BSA）对细胞进行处理。 3. 经过一夜的无血清培养后，吸出细胞培养基，并用PBS进行冲洗。 4. 加入胰蛋白酶溶液以启动细胞分离。 5. 将细胞悬液转移至试管中，以350×g离心5分钟。 6. 将细胞重新置于预热的细胞培养基中。 7. 将细胞悬浮液稀释至接种密度为100,000个细胞/ml。

1. 向接收板的每个孔中加入200μl含或不含化学引诱剂的培养基（在此情况下，不同浓度的FCS从0.25%到10%不等）。 2. 将上述制备的细胞悬液以50μl的量加入膜板的各个孔中。 3. 将细胞培养板置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养24小时。

1. 从接收板的各孔中吸出细胞培养基。 2. 向接收孔中加入150μl无血清培养基和8μM（在DMSO中稀释）钙黄绿素AM。 3. 在37°C、5% CO2的条件下培养45分钟。 4. 从膜板和接收板的每个孔中吸出细胞培养基。 5. 用PBS冲洗两块板的孔。 6. 向接收板中加入胰蛋白酶溶液，以使膜下侧迁移的细胞开始脱离。 7. 将胰蛋白酶溶液孵育10分钟，轻轻摇动。 8. 将180μl胰蛋白酶细胞悬浮液转移至黑色96孔微孔板的每个孔中。 9. 在激发波长为485nm、发射波长为520nm的读板器中读取荧光信号。

1. 从膜板的各孔中吸出培养基。 2. 使用预湿棉签，顺时针和逆时针方向轻轻旋转棉签，去除膜上部（顶端）未迁移的细胞。 3. 通过绿色通道中的荧光显微镜检测膜下侧迁移细胞的荧光信号。 此外，ThinCert®96孔HTS小室由于其独特的孔结构提供了高透明度，这一特点促进了活细胞的观察，用于检查细胞形态、评估细胞融合，并以更高的准确性和可靠性进行污染监测。因此，每次实验都伴随着对细胞的连续显微镜监测。

在探索更优生物标志物、治疗靶点和药物以干预肿瘤转移、血管生成及炎症性疾病等复杂现象方面，体外细胞迁移实验是不可或缺的工具。这些实验提供了一种可控环境，便于测量细胞迁移和分析不同分子的影响，例如生长因子和趋化因子，或候选药物。在迁移实验中，孔径的精准选择至关重要。孔径必须与所研究细胞的尺寸相匹配，既需足够限制以防止细胞被动移动，又要足够开放以促进其主动迁移。以下表格显示了一般膜孔径选择的建议。

考虑到这一实验过程中的关键因素，选择合适的细胞培养技术与工具，对于提升实验结果的可靠性和准确性至关重要。借助利来国际的优质产品和服务，科研人员能够更高效地进行细胞迁移实验，为生物医学研究开辟新的前景。同时，选择利来国际的产品，也能进一步优化实验条件，提升细胞观察的清晰度和效果，更好地支持研究和临床应用的需求。